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選擇紫外分光光度計(jì)的決定因素有哪些

更新時(shí)間:2022-10-25 瀏覽:1413次

  分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團(tuán)的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
  實(shí)驗(yàn)證明,不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同,這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度,以確定選擇哪一種溶劑。
  實(shí)驗(yàn)室選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要和目的用途來(lái)考慮,光學(xué)構(gòu)造和光源、探測(cè)方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。
  光學(xué)構(gòu)造
  一般來(lái)說(shuō),紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測(cè)量。一束給定波長(zhǎng)的光通過(guò)對(duì)照物,然后再通過(guò)實(shí)際樣品溶液,就能得到吸光結(jié)果。
  雙光束型則是通過(guò)一個(gè)斬光輪將一束光分成兩束,分別測(cè)量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品。可以小化光漂移和減少測(cè)量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來(lái)代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測(cè)量對(duì)照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y(cè)量的速度,所以雙光束分光光度計(jì)在測(cè)量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
  光源和檢測(cè)方法
  分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢購(gòu)入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。
  分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗(yàn)要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測(cè)量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。
  為了測(cè)量吸光值,分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管。PMTs提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測(cè)量。
  樣品類型
  在大部分的樣品類型中,分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對(duì)于小實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō),制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來(lái)滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
  用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來(lái)滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。
  數(shù)據(jù)管理
  大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,通常與PC機(jī)一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶也可以選擇升級(jí)軟件以滿足他們的需要。
  另外一個(gè)值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的終使用。各獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室都有各自感興趣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

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